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背景
內(nèi)皮素是由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的含有21個氨基酸的血管收縮肽，在血管穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。內(nèi)皮素-1是內(nèi)皮素的一個亞型，內(nèi)皮素含有ET-1、ET-2和ET-3三種亞型，具有不同的表達(dá)區(qū)域，至少與四種已知內(nèi)皮素受體結(jié)合，即ETA、ETB1、ETB2和ETC[1]。

內(nèi)皮素收縮血管和升高血壓，它們通過其它機(jī)制保持平衡狀態(tài)，但是，當(dāng)它們過表達(dá)時，它們可以引起高血壓和心臟疾病。

內(nèi)皮素是已知的最有效的血管收縮劑[2]。在健康的個體中，由內(nèi)皮素、其它血管收縮劑、一氧化氮、前列腺素以及其它血管擴(kuò)張劑共同作用保持血管收縮和血管舒張之間的微妙平衡。內(nèi)皮素多肽與受體在體內(nèi)廣泛分布，參與機(jī)體內(nèi)各種生理和病理過程。內(nèi)皮素失調(diào)可能引起許多疾病，例如幾種類型的癌癥、下蛛網(wǎng)膜下腔出血導(dǎo)致的血管痙攣、動脈高血壓和其他心血管疾病、疼痛調(diào)節(jié)以及II型糖尿病等[3]。

參考文獻(xiàn)：

1. Medical physiology a cellular and molecular approach (2nd ed., International ed. ed.). Philadelphia, PA: Saunders/Elsevier. 2009. pp. 480.

2. Modern pharmacology with clinical applications (6th ed. ed.). Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. 2004. pp. 215.

3. Bagnato A, Rosanò L (2008). "The endothelin axis in cancer". Int. J. Biochem. Cell Biol. 40 (8): 1443–51.

二硫鍵廣泛存在與蛋白結(jié)構(gòu)中，對穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)具有非常重要的意義，二硫鍵一般是通過序列中的2個Cys的巰基，經(jīng)氧化形成。
 

形成二硫鍵的方法很多：空氣氧化法，DMSO氧化法，過氧化氫氧化法等。
 

二硫鍵的合成過程，  可以通過Ellman檢測以及HPLC檢測方法對其反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)測。  
   

如果多肽中只含有1對Cys，那二硫鍵的形成是簡單的。多肽經(jīng)固相或液相合成，然后在pH8-9的溶液中進(jìn)行氧化。      
 

當(dāng)需要形成2對或2對以上的二硫鍵時，合成過程則相對復(fù)雜。盡管二硫鍵的形成通常是在合成方案的最后階段完成，但有時引入預(yù)先形成的二硫化物是有利于連合或延長肽鏈的。通常采用的巰基保護(hù)基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。我們分別列出兩種以2-Cl樹脂和Rink樹脂為載體合成的多肽上多對二硫鍵形成路線：
 

二硫鍵反應(yīng)條件選擇    
 

 二硫鍵即為蛋白質(zhì)或多肽分子中兩個不同位點(diǎn)Cys的巰基（-SH）被氧化形成的S-S共價鍵。 一條肽鏈上不同位置的氨基酸之間形成的二硫鍵，可以將肽鏈折疊成特定的空間結(jié)構(gòu)。多肽分 子通常分子量較大，空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)中形成二硫鍵時要求兩個半胱氨酸在空間距離上接近。 此外，多肽結(jié)構(gòu)中還原態(tài)的巰基化學(xué)性質(zhì)活潑，容易發(fā)生其他的副反應(yīng)，而且肽鏈上其他側(cè)鏈 也可能會發(fā)生一系列修飾，因此，肽鏈進(jìn)行修飾所選取的氧化劑和氧化條件是反應(yīng)的關(guān)鍵因素， 反應(yīng)機(jī)理也比較復(fù)雜，既可能是自由基反應(yīng)，也可能是離子反應(yīng)。      

反應(yīng)條件有多種選擇，比如空氣氧化，DMSO氧化等溫和的氧化過程，也可以采用H2O2，I2， 汞鹽等激烈的反應(yīng)條件。
 

空氣氧化法： 空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經(jīng)典的方法，通常是將巰基處于還原態(tài)的多肽溶于水中，在近中性或弱堿性條件下（PH值6.5-10），反應(yīng)24小時以上。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能，該方法通常需要在低濃度條件下進(jìn)行。
 

碘氧化法：將多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘進(jìn)行氧化，反應(yīng)15-40min。當(dāng)肽鏈中含有對碘比較敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時，氧化條件要控制的更精確，氧化完后，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過量的碘。 當(dāng)序列中有兩對或多對二硫鍵需要成環(huán)時，通常有兩種情況：
 

自然隨機(jī)成環(huán):       序列中的Cys之間隨機(jī)成環(huán)，與一對二硫鍵成環(huán)條件相似；
 

定點(diǎn)成環(huán)：       定點(diǎn)成環(huán)即序列中的Cys按照設(shè)計要求形成二硫鍵，反應(yīng)過程相對復(fù)雜。在 固相合成多肽之前，需要提前設(shè)計幾對二硫鍵形成的順序和方法路線，選擇不同的側(cè)鏈 巰基保護(hù)基，利用其性質(zhì)差異，分步氧化形成兩對或多對二硫鍵。       通常采用的巰基保護(hù) 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多種基團(tuán)。